聚六亞甲基胍消毒液殺菌效果及奶牛場(chǎng)應(yīng)用觀(guān)察

原創(chuàng) 2016-04-22 張 弦 張崢臻 上海市奶牛研究所

摘要

為了解聚六亞甲基胍的殺菌及奶牛場(chǎng)應(yīng)用效果，采用瓊脂殺菌試驗(yàn)選擇奶牛場(chǎng)最低使用濃度，微量肉湯稀釋法測(cè)定消毒液最低抑菌濃度（MIC），現(xiàn)場(chǎng)帶畜消毒試驗(yàn)，奶牛粘膜刺激試驗(yàn)和消毒液抗生素殘留檢測(cè)試驗(yàn)。結(jié)果表明聚六亞甲基胍在實(shí)驗(yàn)室針對(duì)奶牛場(chǎng)所分離的大腸桿菌和葡萄球菌的最低抑菌劑量分別為0.125%和0.0625%，因而推薦奶牛場(chǎng)最低使用濃度為0.2%；帶畜消毒時(shí)動(dòng)物并無(wú)排斥行為；將推薦最低使用濃度的消毒液涂抹于奶牛鼻粘膜、陰道粘膜、乳房，并無(wú)過(guò)敏等異常反應(yīng)發(fā)生；當(dāng)聚六亞甲基胍濃度大于0.02%時(shí)，抗生素檢測(cè)為陽(yáng)性；當(dāng)其濃度小于0.002%時(shí)，抗生素檢測(cè)為陰性。

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關(guān)鍵字

A

聚六亞甲基胍；殺菌效果；MIC；帶畜消毒

聚六亞甲基胍（PHMG），為一類(lèi)環(huán)保型高分子聚合物殺菌劑，其性能優(yōu)越，具有高效、安全、穩(wěn)定、無(wú)刺激性等特點(diǎn)。聚六亞甲基胍中的胍基溶于水后帶正電荷，易吸附在帶負(fù)電荷的微生物表面，并且能滲透到微生物體內(nèi)，破壞微生物體的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和能量物質(zhì)代謝，使細(xì)菌和病毒喪失了活性。同時(shí)，聚合物形成的薄膜將會(huì)堵塞微生物的呼吸通道，使微生物迅速窒息而死亡,從而起到殺菌的作用。基于這一作用機(jī)理，病原微生物不易產(chǎn)生耐藥性，因此，聚六亞甲基胍在紡織、水產(chǎn)養(yǎng)殖、洗手液等行業(yè)應(yīng)用較為廣泛，但在畜禽養(yǎng)殖業(yè)方面的應(yīng)用較少。為觀(guān)察該消毒液殺菌效果和奶牛場(chǎng)應(yīng)用效果，在實(shí)驗(yàn)室和奶牛場(chǎng)分別進(jìn)行了試驗(yàn)觀(guān)察。本試驗(yàn)所使用的聚六亞甲基胍溶液的含量為25%。

一、材料與方法

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消毒劑和試驗(yàn)菌

本試驗(yàn)所用消毒液由上海特龍生物科技發(fā)展有限公司提供，聚六亞甲基胍的含量為25%。

本次試驗(yàn)所用菌種為從上海地區(qū)某奶牛場(chǎng)采集的大腸桿菌和葡萄球菌，經(jīng)稀釋液配制成試驗(yàn)菌懸液備用。

2

瓊脂殺菌（抑菌試驗(yàn)）

用去離子滅菌水將消毒液稀釋成不同的濃度（1%、0.5%、0.25%、0.125%、0.063%、0.031%、0.016%）。取兩塊血平板用接種環(huán)挑取大腸桿菌和葡萄球菌分別作致密劃線(xiàn)。將不同濃度的消毒液滴加10μl于瓊脂表面，不同濃度的消毒液排布方式參考藥敏試驗(yàn)不同的藥敏紙片排布。置37℃培養(yǎng)24h后觀(guān)察消毒液覆蓋范圍內(nèi)細(xì)菌生長(zhǎng)情況，完全無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的最低濃度推薦為最低使用濃度。

3

微量肉湯稀釋法測(cè)定MIC試驗(yàn)

取一塊96孔板，在每孔中加入含TTC的滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯100μl。在A∕B∕C∕D∕E∕F六排的第一孔內(nèi)加入有效濃度為5%的消毒液100μl，然后對(duì)消毒液進(jìn)行二倍稀釋。即第一孔中加入消毒液后用移液槍充分吹打（至少5次以上）使消毒液與肉湯充分混勻，然后吸取100μl 加入第二孔再吹打使之與肉湯充分混勻，照此重復(fù)直至最后一孔，吸取100μl 棄去；此時(shí)前六排每孔消毒液有效成分稀釋度從左至右依次1：40，1：80，1：160，1：320，1：640，1：1280，1：2560，1：5120，1：10240，1∶20480，1：40960，1：81920。在A∕B∕C三排中每孔加入5μl大腸桿菌懸液，在D∕E∕F三排中加入5μl葡萄球菌懸液。在G排前六孔加入5μl大腸桿菌懸液，后六孔加入5μl葡萄球菌懸液，作為陽(yáng)性對(duì)照。H排不加肉湯以外其他任何物質(zhì)，作為陰性對(duì)照。置37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18~24h后觀(guān)察，若有細(xì)菌生長(zhǎng)TTC會(huì)顯示紅色；若沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)TTC則不變色。前六排中未變紅色的最后一孔所對(duì)應(yīng)的濃度便為消毒液的MIC值。

4

奶牛場(chǎng)帶畜消毒試驗(yàn)

隨機(jī)選擇奶牛場(chǎng)奶牛的一個(gè)區(qū)（每個(gè)區(qū)平均分為兩塊區(qū)域，兩個(gè)區(qū)域之間牛只可以自由活動(dòng)），選擇其中一個(gè)區(qū)域，進(jìn)行噴灑消毒（消毒液濃度為以上試驗(yàn)所得推薦最低使用濃度），消毒范圍包括空氣、臥床和欄桿。觀(guān)察奶牛行為有無(wú)異常，是否愿意在這一區(qū)域內(nèi)活動(dòng)，有無(wú)排斥反應(yīng)。

5

粘膜刺激試驗(yàn)

在奶牛場(chǎng)隨機(jī)選擇8頭奶牛，保定后用棉簽蘸取推薦使用濃度的消毒液，涂抹于奶牛鼻粘膜、陰道粘膜以及乳頭表面，五分鐘后觀(guān)察奶牛有無(wú)過(guò)敏或其他異常反應(yīng)。

6

消毒液抗生素殘留檢測(cè)

取6個(gè)ECLIPSE50（E50）抗生素檢測(cè)試劑單孔，使用牛奶將消毒液稀釋到0.2%、0.02%、0.002%、0.0002%的有效濃度，取50μl加入到檢測(cè)孔中，剩下兩孔分別做陰性對(duì)照（加入無(wú)抗奶）和陽(yáng)性對(duì)照（10ppb青霉素樣品）。密封后將檢測(cè)孔放入65℃水浴鍋中，培養(yǎng)2小時(shí)30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后取出檢測(cè)孔從側(cè)面觀(guān)測(cè)孔中顏色，記錄結(jié)果。

判讀標(biāo)準(zhǔn)：黃色到淺黃色包括綠色為陰性結(jié)果范圍；藍(lán)綠色到紫色為陽(yáng)性結(jié)果范圍。

結(jié)果

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瓊脂殺菌（抑菌試驗(yàn)）結(jié)果

消毒液在稀釋到0.125%時(shí)，其覆蓋范圍內(nèi)大腸桿菌完全不生長(zhǎng)，在0.0625%范圍內(nèi)有少量生長(zhǎng)，之后的稀釋度生長(zhǎng)良好。結(jié)果表明該消毒液對(duì)大腸桿菌的有效殺滅濃度應(yīng)在0.125%以上。

消毒液在稀釋到0.0625%時(shí)，其覆蓋范圍內(nèi)葡萄球菌完全不生長(zhǎng)，在之后的稀釋度生長(zhǎng)良好。結(jié)果表明該消毒液對(duì)葡萄球菌的有效殺滅濃度應(yīng)在0.0625%以上。

綜合該消毒液對(duì)大腸桿菌和葡萄球菌的有效殺滅濃度，推薦實(shí)際使用的最低濃度為0.2%。

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MIC試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果顯示，5%消毒液在稀釋到第10孔時(shí)，指示劑TTC變紅，大腸桿菌及葡萄球菌開(kāi)始大量生長(zhǎng)，這表明消毒液在稀釋到第9孔以后即0.01%以下時(shí)，消毒液殺菌效果不佳。即消毒液對(duì)大腸桿菌和葡萄球菌的最低抑菌濃度低于0.1gL。

3

奶牛場(chǎng)帶畜消毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果

奶牛表現(xiàn)正常，對(duì)消毒區(qū)域并無(wú)明顯排斥行為。表明該消毒液可進(jìn)行帶畜消毒，消毒不會(huì)影響奶牛正常活動(dòng)。

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奶牛粘膜刺激試驗(yàn)結(jié)果

8頭奶牛粘膜在涂抹0.2%聚六亞甲基胍消毒液后并無(wú)明顯、紅腫、發(fā)癢等過(guò)敏癥狀，奶牛表現(xiàn)正常。表明該消毒液對(duì)奶牛粘膜的刺激指數(shù)為0，屬于無(wú)刺激性，因而可在奶牛場(chǎng)內(nèi)放心使用。

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消毒液抗生素殘留檢測(cè)結(jié)果

結(jié)果表明消毒液有效濃度在0.02%以上時(shí)抗生素檢測(cè)為陽(yáng)性；當(dāng)有效濃度低于0.002%時(shí)抗生素檢測(cè)為陰性。在奶牛場(chǎng)實(shí)際生產(chǎn)中，若是乳頭上攜帶有消毒液，經(jīng)擠奶前清洗、藥浴和擦干后，其殘留量一般為使用劑量的11000~110000，所以，0.2%的聚六亞甲基胍即使接觸到了奶牛乳房，也并不會(huì)造成牛奶中抗生素的殘留。

結(jié)語(yǔ)

結(jié)果表明，聚六亞甲基胍消毒液在奶牛場(chǎng)中理想的使用濃度為0.2%，此濃度對(duì)奶牛場(chǎng)中的常見(jiàn)菌均有較好的抑制殺滅效果。奶牛對(duì)該濃度的消毒液無(wú)明顯排斥行為，消毒液對(duì)奶牛皮膚和粘膜也無(wú)明顯刺激性。因此該消毒液安全可靠，可用于奶牛場(chǎng)帶畜時(shí)的環(huán)境消毒。

（作者：張弦，張崢臻，張瑞華，張克